拼接in的方法_C2+ Confocal之大图拼接

“组织这么大，我想都看看”

奈何单个视野看不全，低倍镜分辨率又不高

那么怎样在保证图像分辨率的同时，快速地扫描一张完整的脑片呢？Scan large image功能来为你支招~

    大图 拼接   

按照常规多色荧光拍摄方法，视野下找到组织的位置与焦平面

开PFS(完美对焦系统)：显微镜载物台右下侧，二向色镜拨片拨至IN位置，并点击界面开关按钮，使PFS进入工作状态

光路切换到激光状态，在当前视野下，调节PFS旋钮聚焦，再依次设置好每个通道的拍摄参数(HV，Laser power)

需要拼接的范围较大时，可能耗时较长，建议更改Fast Mode为1/2，Average切换为Normal

 点击Acquire调出Scan large image窗口

1.选择当前的光路配置 

2.选择物镜倍数 

3.目视下移动载物台，设定扫描范围的left、top、right、bottom边界

4.设定overlap值为15%(图像的重叠补偿率)

5.光路切回激光状态，调节PFS旋钮确认焦距

6.点击Scan进行扫描

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小Tips
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1．选择扫描的各个边界时，可以适当预留距离，保证视野的完整性；

2．每次选好left、top、right、bottom边界后，注意观察下方显示的拍摄视野数量(如3×6 fields)，如果过多，可以重新选择并调整视野范围；

3. 开PFS是为了在载物台移动过程中保持良好对焦，避免局部视野模糊或拼接边界明显，所以大家一定要记得打开PFS功能哦；

4．另外，拼接完成的大图建议以nd2.文件格式及时保存！